Amy Poehler a travaillé, à Chicago et à New York, dans la troupe d’improvisateurs/ auteurs et interprètes de sketches Upright Citizens Brigade. Elle a également participé en tant qu'auteur-interprète aux trois saisons de leur émission comique sur la chaîne Comedy Central, ainsi qu'à la création de leur salle, reconnue aujourd'hui comme le meilleur théâtre de sketches et d’improvisations de New York.
Elle alterne entre séries télé et films. Elle a ainsi participé à des shows télévisés aussi divers que
Les Années Campus,
Saturday Night Live et
Arrested Development et à de nombreux films: en 1999 elle joue dans
Deuce Bigalow: Male Gigolo puis en 2001, dans
Wet Hot American Summer. En 2004 elle joue dans
Envy avec Ben Stiller et Jack Black et dans
La Légende De Ron Burgundy Présentateur Vedette avec Will Ferrell. On la retrouve la même année dans
Lolita Malgré Moi de Mark Waters. En 2006 elle joue dans
Southland Tales de Richard Kelly, dans
Tenacious D In The Pick Of Destiny, dans
Monsieur Woodcock de Craig Gillespie et enfin dans
Son Ex Et Moi de Jesse Peretz. En 2007 elle prête sa voix à Blanche Neige dans
Shrek et joue dans
Les Rois Du Patin de Josh Gordon et Will Speck.
En 2008, elle prête encore sa voix pour
Horton.
La même année elle signe, produit et joue dans
Wild Girls Gone. On la retrouve ensuite dans
Baby Mama,
Hamlet 2,
Groupies et dans
On Broadway.
