Né à Berkeley, en Californie,
Andy Samberg est membre du groupe de comédie The Lonely Island, comme deux autres de ses amis d’enfance. Il participe à la création des sketchs à la fois comme réalisateur, scénariste, acteur et producteur. Ces derniers sont diffusés sur le site Channel101.com.
En 2004,
Andy Samberg et ses compagnons rencontrent Jimmy Fallon lors des MTV Video Music Awards. Ce dernier leur suggère alors de passer une audition pour intégrer le célèbre Saturday Night Live, qui a déjà révélé des comédiens tels que Will Ferrel, Bill Murray, ou encore Eddy Murphy. Andy Samberg est alors recruté comme comédien pour le show, tandis que ses amis de The Lonely Island, Akiva Shaffer et Jorma Taccone, sont engagés comme scénaristes.
En 2007,
Andy Samberg obtient le rôle principal du film
Hot Rod, le premier long-métrage imaginé par The Lonely Island et produit par Lorne Michaels, le créateur de
Saturday Night Live. On le retrouve en 2008 pour le film d'animation
Les Chimpanzés De L'Espace, auquel il prête sa voix. En 2009,
Andy est à l'affiche de
I Love You, Man, et tourne
Tempête De Boulettes Géantes.