Né de parent Coréen,
John Cho développe depuis son enfance l'envie de devenir acteur. En 1978, ses parents décident de s'installer à Los Angeles, où il sera élevé. Il joue des petits rôles à la télévision comme dans
Felicity ou
Charmed.
Mais c'est en 1999 que la consécration arrive : il joue le rôle, discret mais présent, de John dans
American Pie. Ce rôle marque une grand collaboration avec les frères Weitz qui le feront jouer dans leurs série
Sexe Et Dépendances et dans
American Pie 2 et
American Pie 3 : Marions-les !.
En 2004, il interprete le role d'Harold dans la comédie, devenue culte au Etats-Unis,
Harold & Kumar Chassent Le Burger et reprendra le rôle en 2008 dans la suite
Harold Et Kumar S'évadent De Guantanamo.
Toujours présent dans de nombreux autres films (
Solaris) ou série (
How I Met Your Mother,
Ugly Betty), il retrouve Paul Weitz dans
En Bonne Compagnie.
John Cho enchaine avec des rôles plus sérieux comme celui, en 2009, de Sulu dans le film
Star Trek.