C'est en 2007, après avoir été remarqué par hasard aux Jardins du Luxembourg que Pauline Acquart débute sa carrière dans le long-métrage de
Céline Sciamma,
Naissance Des Pieuvres, dans lequel elle tient l'un des rôles principaux.
Les années qui suivent, elle participe au tournage de deux courts-métrage,
Au Septième Jour et
Le Chant Des Sirènes. En 2009, elle joue dans le téléfilm controversé
Mourir D'Aimer aux côtés de
Muriel Robin, puis retourne au cinéma en 2010 dans le film de
Géraldine Bajard,
La Lisière.